western blotting堪称蛋白质研究中的经典方法。学生物的几乎无人不晓，即使没亲手做过，也清楚其原理。经典果然是经典，30年来其操作步骤几乎没变过，依然是跑胶-转膜-封闭-孵育-检测。近两年，各大公司陆续推出了western blotting方面的新仪器，如新型转印系统，确实能省时省力不少，但仍然不能完全克服研究人员在今天面临的挑战。western blotting仍存在重复性差、实验耗时长、无法准确定量等问题。
近日，美国proteinsimple公司推出了一种simple western™分析，彻底改变了整个western blot。此分析在一台名为simon的仪器上开展，simon将所有实验步骤自动化，包括蛋白上样和分离、免疫印迹、洗涤、检测以及数据的定量分析，让研究人员从繁重的劳动中解放出来，同时避免了可能影响实验重复性的人为因素。
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无需凝胶、无需转印，放入您的样品，按个按钮，然后就没事了。几个小时之后，完全分析好的结果正等着你呢，一切听上去是不是有点不可思议？那么让生物通小编带你看看simon是如何工作的。
首先，将样品与simple western样品缓冲液混合，至终浓度1 μg/μl，还原并变性，然后将制备好的样品、一抗和二抗、化学发光底物分配到384孔分析板的指定孔中。之后，将simple western分析缓冲液、毛细管和制备好的分析板放入simon内，它自动开展所有分析步骤。
当蛋白沿着毛细管内一个堆积和分离基质迁移时，它们分离。分离后的蛋白固定到毛细管壁上。之后利用一抗鉴定目标蛋白，用hrp结合的二抗和化学发光底物检测蛋白。系统自动报告检测蛋白的分子量和信号。每次实验可同时分析最多12个样品，结果可在3-5小时内获得。15-150 kda的目标蛋白均可检测。软件报告每个检测蛋白的分子量、面积、面积百分比和信噪比。
对于传统的western blot而言，结果的重复性一直是个挑战，因为缺乏标准化的操作，且多个操作步骤引入了实验可变性。而simple western分析是完全自动化的，因此结果的重复性更好。整体的定量也大大改善了，因为省去了转印步骤，从而避免了蛋白转移的不一致。
有了simple western，western真的简单了。你可以省下大量时间，干更有意义的工作，同时获得重复性更好的半定量western blot结果。
来源：行业资讯
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