作者：梁俊荣,张西臣,柳增善,刘庆双

摘要:实验以香菇、ｌ-肉碱、二十八醇、牛磺酸、维生素ｅ为原料,采用正交试验方法进行了抗疲劳功能性食品添加剂方剂设计,得到四个较优配方;通过游泳耐力和生化指标的测定研究了四个较优配方的抗疲劳效果。结果表明,四个较优配方均能显著延长小鼠游泳时间,降低血清尿素氮和血乳酸含量,具有明显的抗疲劳效果。

关键词:香菇;抗疲劳;添加剂;方剂

香菇是食用菌中的佳品,所含香菇多糖具有良好的抗疲劳作用[1]。ｌ-肉碱和二十八醇提高可以提高糖原蓄积能力,增强机体耐力[2]。ｖｅ和牛磺酸均为有效的自由基剂,可阻断自由基对线粒体的破坏作用,延缓疲劳发生。本研究以香菇、ｌ-肉碱、二十八醇、牛磺酸、维生素ｅ(ｖｅ)为原料,采用正交试验方法设计配方,并通过游泳耐力和生化指标的测定对所设计的配方进行抗疲劳效果研究,以期获得较为理想的抗疲劳功能性食品添加剂方剂。

1 材料与方法

1 1 供试药品 香菇为吉林农业大学长白山资源开发研究所产品,二十八醇(纯度为90%)和ｌ-肉碱(纯度高于99%)购自北京恒天易德化工有限公司,ｖｅ(纯度70%)购自江苏春之谷生物制品有限公司,牛磺酸(纯度高于99%)购自湖北富驰化工医药股份有限公司。

1 2 实验动物及给式 18～22ｇ昆明种雄性小白鼠,大学实验动物中心提供。在(22±1)℃温度下饲养,自由采食饮水,每天光照8ｈ。小鼠适应性饲养一周。将药品混入饲料中,以饲喂法给药两周,测定各有关指标。

1 3 游泳耐力的测定 将小鼠放入(25±1)℃的水中,水深为30ｃｍ,水面面积为100ｃｍ×50ｃｍ。以小鼠自游泳开始至沉入水底无力上浮的时间作为游泳时间。游泳时室温控制在(25±1)℃。

1 4 多因素正交试验[3] 设定五个因素、两个水平,按ｌ16(215)正交表(见表2)进行正交试验,每个处理组合做6个重复。以游泳耐力为观察指标确定香菇、ｖｅ、ｌ-肉碱、牛磺酸、二十八醇五个因素的主效应及其交互作用。通过结果分析设计抗疲劳复方添加剂配方。

各因素的剂量水平设计依据如下:中国ｇｂ2760-1996(1997增补品种)规定肉碱的推荐用量为300ｍｇ/ｄ,ｖｅ为30ｍｇ/ｄ,牛磺酸在食品中的强化量一般为0 2%～0 4%。体重以60ｋｇ计,小鼠食量以200ｇ/(ｋｇ·ｄ)计,小鼠的两个剂量分别设定为人的5倍、10倍,据此推算出1ｋｇ饲料中的添加量。香菇的两个剂量水平分别为0ｇ/ｋｇ饲料、60ｇ/ｋｇ饲料,二十八醇的两个剂量水平分别为8ｍｇ/ｋｇ饲料、20ｍｇ/ｋｇ饲料。正交试验设计的因素水平见表1。

1 5 配方的抗疲劳功能试验 由于正交试验仅以游泳耐力为指标,只能对配方的抗疲劳效果进行初步观察,故对所设计的配方通过游泳耐力、血乳酸、血尿素氮(ｂｕｎ)的测定进一步进行抗疲劳功能试验以精选配方,确定配方。试验设1个对照组和若干个试验组,每组30只小鼠。给药两周后,每组各取10只测游泳耐力;另取10只置于水温(30±1)℃水中游泳90ｍｉｎ,游泳后休息60ｍｉｎ拔眼球采血,用二乙酰一肟法测ｂｕｎ;剩余的10只小鼠在尾根部负荷5%体重铅皮,同样条件下游泳10ｍｉｎ,游泳后安静15ｍｉｎ采血,用汇力生物工程技术开发中心生产的乳酸测定试剂盒测定血乳酸。

2 结果与分析

2 1 正交试验结果及分析 见表2、表3。从直观分析结果可知,香菇、二十八醇、ｌ-肉碱三个因素的极差(ｒ)较大,是影响游泳耐力的关键因素,且均以水平2为优;其它试验因子及各因子之间的交互作用对游泳耐力的影响较小,取水平1或水平2均可。因此,通过水平选优得到四个较优配方:ａ2ｂ1ｃ2ｄ1ｅ2、ａ2ｂ1ｃ2ｄ2ｅ2、、ａ2ｂ2ｃ2ｄ1ｅ2与ａ2ｂ2ｃ2ｄ2ｅ2。四个配方中,ａ2ｂ1ｃ2ｄ2ｅ2(2号)和ａ2ｂ2ｃ2ｄ1ｅ2(3号)分别是正交表中12号和15号处理组合,其游泳时间在16种处理组合中分居、位,配方ａ2ｂ1ｃ2ｄ1ｅ2、(1号)与ａ2ｂ2ｃ2ｄ2ｅ2(4号)在正交表中没有出现。

2 2 配方抗疲劳功能试验结果 结果见表4。1组为对照组,2、3、4、5组分别为四个配方组。与对照组相比,四个配方均能显著延长小鼠游泳时间,明显降低小鼠游泳后血乳酸和ｂｕｎ含量;四个配方组间各指标差异均不显著,且1、2、3号配方组各指标非常相近,4号配方组与前三个组相比略有差距。根据《保健食品功能学评价程序与方法》中的有关规定,认为四个较优配方均有抗疲劳作用。从各项指标的测定结果来看,1、2、3号配方优于4号配方。与2号、3号配方相比,1号配方由于ｖｅ和牛磺酸用量较少,成本较低。因此,综合考虑抗疲劳效果与成本,认为1号为*佳方剂。

3 结论

四个较优配方均有良好的抗疲劳功能,其中1号*佳。

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